液相色譜儀操作步驟：　

1)．過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。

2)．對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

3)．打開HPLC工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。

4)．進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。

5)．有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10 ml/min。

6)．調節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。

7)．設計走樣方法。點擊file，選取select users and methods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊new method。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

8)．進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

9)．關機時，先關計算機，再關液相色譜。

10)．填寫登記本，由負責人簽字。

注意事項：

1)．流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。

2)．柱子是非常脆弱的，第yi次做的方法，先不要讓液體過柱子。

3)．所有過柱子的液體均需嚴格的過濾。

4)． 壓力不能太大，hao不要超過2000psi

1.使用”保護柱”，能夠延長色譜柱的使用壽命。簡單的說，”保護柱”即是很短的色譜柱，填裝和所使用液相色譜柱相同的填料。正確使用裝在液相色譜柱前面的”保護柱”，可以阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質。而達到延長柱子壽命的效果。如果使用”保護柱”不當。會造成反效果。因為在保護柱使用過程中。如污染達到一定程度而沒有及時更換，累積的雜物很可能會沖入色譜柱中，反而會造成色譜柱損壞。因此。使用”保護柱”時，重要的是要知道什幺時候該換保護柱。該換的時候就必須要立即更換。

2.選擇高品質的柱子，并注意使用方法；可以延長柱子的使用壽命。一般認為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質都相同，對品質管理很嚴格的廠家而言，這說法是成立的。但如果廠家品質管理不夠嚴格，即使是同一批號的新柱子之間的品質也有差異。所以，選用柱子時必須選擇管理嚴格的高品質柱子，我們知道，任何柱子使用過后都會產生變化。尤其如在強酸或強堿條件下使用，柱子更易產生變化。因此，應盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發(fā)新分析方法時，許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經使用。柱性會改變；如此一來，使用舊柱子開發(fā)出來的新分析方法，很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時。發(fā)生無法達到預定效果的情況?？偟恼f。開發(fā)新分析方法時要使用品質好的新柱子；并且一支柱子hao使用在一種分析方法上；則柱子壽命可以延長。

3.定期沖洗柱子可以延長柱子使用壽命。我們知道柱子使用一段時間后總會有一些雜質累積在柱內。這些雜質不會隨著流動相出來，自然會逐漸影響柱子的品質。這些雜質在后來的分析譜圖上出現。而造成出現怪峰、基線不平等現象。簡單的解決方法是用較強的流動相沖洗。hao是在每次分析某一產品完成后沖洗。如果分析時使用緩沖劑時﹐hao用水來取代緩沖劑。先使用有機和水的混合溶液為流動相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機溶劑沖洗。如果不先用有機和水的混合溶液沖洗，而直接用100%有機溶劑沖洗的話，緩沖劑很可能會沉淀出來，而損壞柱子的品質。使用10-20倍柱體積的量來沖洗基本就足夠了。專家建議hao將100%有機溶劑沖洗的條件加在分析實驗程序完畢地后，如此一來每天在開機前都會用100%機溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將柱子倒反接后再沖洗。打算使用反沖洗處理前，hao參考柱子的保養(yǎng)說明書。所以要真正保護柱子，使柱子的壽命延長，hao是使用”保護柱”和定期沖洗柱子